Otimização de uma metodologia para a determinação da composição em ácidos gordos da membrana de eritrócitos por GC-FID
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Atualmente é consensual a ideia de que a composição lipídica tem influência determinante
no risco de algumas doenças crónicas. A ingestão de grandes quantidades de ácidos
gordos saturados e ácidos gordos trans tem sido associado a dislipidémias e aumento do risco
de doenças cardiovasculares, enquanto que o consumo de ácidos gordos polinsaturados,
especialmente ómega-3, tem sido associado a diversos benefícios para a saúde. Pelo facto
de os eritrócitos apresentarem um elevado tempo de vida, tem sido sugerido por diversos
autores que o perfil em ácidos gordos das membranas destas células poderá ser usado
não apenas como um biomarcador que reflita a ingestão de macronutrientes da dieta, mas
também como um biomarcador associado a diferentes patologias como diabetes, cancro e
doenças cardiovasculares. Por este motivo, o presente trabalho teve como objetivo desenvolver
um método simples e rápido para a identificação e quantificação de ácidos gordos
presentes na membrana de eritrócitos utilizando cromatografia gasosa com detetor de ionização
em chama (GC-FID). Para tal, foram obtidas amostras de sangue, a partir das quais se
procedeu ao isolamento da fração contendo eritrócitos. Seguidamente foram testados diferentes
protocolos para a preparação da amostra a ser analisada por GC-FID, incluindo um
método clássico modificado (método de Folch) e quatro métodos rápidos, para os quais a
realização da extração lipídica e reação de derivatização decorrem num passo único. No que
concerne aos métodos rápidos, foi avaliada a influência de diferentes parâmetros, nomeadamente
diferentes tempos de metilação e a realização, ou não, de reação de saponificação.
Com base nos resultados obtidos, selecionou-se o método rápido com saponificação e com
tempo de metilação de 60 minutos como sendo o mais adequado para o objetivo pretendido,
permitindo obter um maior número de ácidos gordos identificados. Agradecimentos:
Ao apoio financeiro concedido pela FCT no âmbito dos projetos PTDC/SAU-ENB/116929/2010
e EXPL/EMS-SIS/2215/2013, COMPETE, QREN e União Europeia (FEDER).
